Bcap-37人乳腺癌細(xì)胞實驗操作步驟

　　Bcap-37人乳腺癌細(xì)胞實驗操作步驟：
 

　　在完成Bcap-37人乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇與傳代后，下一步是進(jìn)行細(xì)胞接種與藥物處理實驗。以下是具體的操作流程：
 

　　1. 細(xì)胞計數(shù)與接種
 

　　- 使用血球計數(shù)板或自動細(xì)胞計數(shù)儀對懸浮的Bcap-37細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度至所需濃度(通常為5×10?~1×10? cells/mL)。
 

　　- 根據(jù)實驗設(shè)計，將細(xì)胞均勻接種于6孔板、96孔板或其他培養(yǎng)器皿中，每孔加入適量培養(yǎng)基(如DMEM+10% FBS)，確保細(xì)胞分布均勻。
 

　　2. 藥物處理
 

　　- 待細(xì)胞貼壁并生長至60%~70%匯合度時(約24小時后)，進(jìn)行藥物處理。
 

　　- 根據(jù)實驗方案配制不同濃度的待測藥物(如化療藥物或靶向抑制劑)，用無菌PBS或培養(yǎng)基稀釋至工作濃度。
 

　　- 小心吸除原培養(yǎng)基，避免擾動細(xì)胞層，隨后加入含藥物的新鮮培養(yǎng)基，同時設(shè)立空白對照組(僅加培養(yǎng)基)和溶劑對照組(如DMSO)。
 

　　3. 培養(yǎng)與觀察
 

　　- 將培養(yǎng)板置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，分別在24h、48h或72h等時間點觀察細(xì)胞狀態(tài)。
 

　　- 使用倒置顯微鏡記錄細(xì)胞形態(tài)變化，注意是否有凋亡(如細(xì)胞變圓、脫落)或壞死(如碎片增多)現(xiàn)象。
 

　　4. 后續(xù)檢測
 

　　- 根據(jù)實驗?zāi)康模蛇x擇MTT法檢測細(xì)胞活力，或通過Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)分析凋亡率。
 

　　- 若需提取蛋白或RNA，需在藥物處理后及時裂解細(xì)胞，避免降解。
 

　　注意事項
 

　　- 藥物濃度需通過預(yù)實驗確定，避免過度毒性或無效劑量。
 

　　- 操作時嚴(yán)格無菌，防止污染影響結(jié)果。
 

　　- 每組實驗建議設(shè)置3個復(fù)孔，確保數(shù)據(jù)可靠性。
 

　　通過以上步驟，可系統(tǒng)評估藥物對Bcap-37細(xì)胞的抑制作用，為后續(xù)機制研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。