對熒光-PCR法的擴增曲線的解讀

更新時間：2022-03-11

點擊次數：839

　　熒光-PCR法技術已經被廣泛應用于臨床疾病診斷各種傳染病診斷和療效評價；臨床疾病診斷動物疾病檢測；食源微生物、食品過敏源、轉基因研究等食品安全操作等等各個領域。目前的實時熒光PCR技術主要是基于熒光共振能量轉移（FRET)的原理，一對合適的熒光物質可以構成一個能量供體(donor)和能量受體(acceptor)對，其中供體的發射光譜與受體的吸收光譜重疊，當它們在空間上相互接近到一定距離(1-10 nm)時，激發供體而產生的熒光能量正好被附近的受體吸收，使得供體發射的熒光強度衰減，受體熒光分子的熒光強度增強。

　　熒光-PCR法試劑盒具有高特異性，與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；檢測靈敏度可達10-100拷貝；操作簡便，該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

　　熒光-PCR法的擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。在qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期，PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的，隨著反應循環數的增加，終PCR反應不再以指數形式生成模板，從而進入平臺期，在該時期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，只有在熒光信號的指數增長期，PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系，可以選擇在這個階段進行定量分析。