探討elisa試劑盒的免疫沉淀技術(shù)

　　elisa試劑盒能便于滲透入組織細(xì)胞內(nèi)，且未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的物理吸附現(xiàn)象。在PPA實驗中稀釋液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液。用特殊的微孔板作為測定板，elisa試劑盒用親和素包被微孔板，然后用生物維生素標(biāo)記探針的3端，再通過該生物維生素和包被在微孔板上的親和素發(fā)生連接，將探針固定在微孔板上，形成一個固相捕獲系統(tǒng)。

　　擴(kuò)增時引物用抗原標(biāo)記，這樣擴(kuò)增產(chǎn)物中就會滲入抗原。

　　PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與微孔板上的探針雜交，從而捕獲被測靶序列，由于擴(kuò)增產(chǎn)物中已經(jīng)滲入抗原，在微孔中加入HRP標(biāo)記抗體后，酶標(biāo)抗體就與靶序列的抗原免疫結(jié)合，后加入酶底物進(jìn)行酶促顯色，elisa試劑盒通過光密度測定實現(xiàn)定量。

　　PCR-ELISA比PCR本身在病毒分型，基因多態(tài)性分析與克隆鑒定等方面有其*的優(yōu)勢。另外，不應(yīng)用同位素標(biāo)記，因而避免了放射性帶來的危害，而且整個實驗周期僅需6h左右，操作簡便，可用于大量標(biāo)本的檢測。盡管與熒光素染色凝膠電泳相比較，PCR-ELISA檢測結(jié)果的特異性，靈敏性和準(zhǔn)確性有顯著的提高，但是ELISA試劑盒基本上是一個開放性的反應(yīng)系統(tǒng)，特別是在洗滌大鼠ELISA試劑盒反應(yīng)板時，很容易造成污染，從而引起假陽性。因此，在PCR-ELISA整個實驗過程中，必須進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作，同時，PCR-ELISA對PCR產(chǎn)物和探針的雜交條件要求嚴(yán)格。