衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人肺炎衣原體抗體IgM（Cpn-IgM）elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 轉錄調節因子

人多功能蛋白聚糖（versican）elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 細胞凋亡 激酶和磷酸酶

人多巴胺-β羥化酶（DBH）elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 糖尿病 糖蛋白

人電子轉運黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉運黃素蛋白脫氫酶elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領域 心血管 細胞生物 免疫學

人低氧誘導因子1α（HIF-1α）elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領域 腫瘤 信號轉導 腫瘤細胞生物標志物 線粒體

人蛋白酶體（prosome,macropain）亞基,β型,2（PSMB2）elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 染色質和核信號

人存活素抗體/生存蛋白（Surv）elisa試劑盒Anti-ANGPTL3 Antibody研究領域 腫瘤 腫瘤細胞生物標志物

人層粘連蛋白-5（LN-5）elisa試劑盒Anti-ANGPTL1 Antibody研究領域 腫瘤 信號轉導 生長因子和激素 腫瘤細胞生物標志物

人補體因子I（CFI）elisa試劑盒Anti-ANGPTL3 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞骨架 腫瘤細胞生物標志物

人補體1q（C1q）elisa試劑盒Anti-ANGPTL8 Antibody研究領域 微生物學 細菌及

人胞質動力蛋白（CD）elisa試劑盒Anti-ANGPTL4 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 信號轉導 糖蛋白

人伴侶蛋白10（CPN10）elisa試劑盒Anti-ANLN Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 信號轉導 轉錄調節因子 G蛋白偶聯受體

布氏肉湯添加劑2ml*5每支加入225ml布氏肉湯中

NA培養基 NA Medium 菌落總數測定

Pfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂)250g/瓶糞鏈球菌選擇性分離incubationmediaPfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂)250g/瓶糞鏈球菌選擇性分離

ListeriaEnrichmentBrothBase

乳糖-明膠培養基  Lactose-Gelatin Medium  250克  產氣莢膜梭菌明膠液化試驗

TSC瓊脂  TSC Agar  250克  產氣莢膜梭菌的平板計數

PY培養基  PY Medium  250克  產氣莢膜梭菌的培養

產芽孢肉湯  Sporulation Broth  250克  產氣莢膜梭菌的產芽孢培養
衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書即刻早期基因ARC抗體2"-O-Glucosylrutin中文名：別名：Quercetin 3-O-β-D-glucopyrasyl(1→2)[α-L-rhampyrasyl(1→6)]-β-D-glucopyraside分子式：C33H40O21

ADP核糖基化因子6抗體Procyanidin B2 3''-O-gallate中文名：原花青素B2-3''-O-沒食子酸酯別名：Epicatechin-(4β→8)-epicatechin 3''-O-gallate分子式：C37H30O16

芳香化酶抗體Procyanidin B5中文名：原花青素B5別名：Procyanidin B-5; Epicatechin-(4β→6)-epicatechin分子式：C30H26O12

Artemin抗體2'',3''-Dihydroochnaflavone中文名：別名：分子式：C30H20O10

alpha 1腎上腺素能受體A抗體Procyanidin C1中文名：原花青素C1別名：分子式：C45H38O18
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。