犬惡絲蟲PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人高靈敏度促甲狀腺激素（U-TSH）elisa試劑盒Anti-B4GALT1 Antibody研究領域  染色質和核信號 細胞周期蛋白

人干擾素調節因子8（IRF8）elisa試劑盒Anti-B4GALT3 Antibody研究領域  細胞生物 免疫學 信號轉導 激酶和磷酸酶

人八聚體轉錄因子（OTF2A）elisa試劑盒Anti-B4GALT5 Antibody研究領域  細胞凋亡

人γ干擾素誘導單核細胞因子（MIG/CXCL9）elisa試劑盒Anti-BACH2 Antibody研究領域  腫瘤 信號轉導 細胞凋亡 細胞粘附分子 細胞分化

人Rho家族GTP酶1（RND1）elisa試劑盒Anti-BAG1 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 神經生物學 信號轉導 干細胞 細胞凋亡 細胞粘附分子 細胞分化

人Rho關聯含卷曲螺旋蛋白激酶2（Rock-2）elisa試劑盒Anti-BAG4 Antibody研究領域  細胞生物 免疫學 細胞表面分子

人DNA損傷誘導轉錄因子4樣蛋白（DDIT4/RTP801）elisa試劑盒Anti-BAGE2 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 表觀遺傳學

人C多肽（CP）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究領域  腫瘤 轉錄調節因子

人Alpha-D 生育酚/維生素E（Alpha-D TPL）elisa試劑盒Anti-BAGE3 Antibody研究領域  信號轉導 細胞粘附分子 細胞骨架

綿羊基質金屬蛋白酶9/明膠酶B（MMP9/Gelatinase B）elisa試劑盒Anti-BAGE4 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶

雞HSP90抗體（IgG）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究領域  細胞生物 細胞膜受體

雞HSP60抗體（IgG）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究領域  細胞生物 染色質和核信號 信號轉導 細胞凋亡 激酶和磷酸酶

大鼠肺炎病毒抗體（PV-Ab）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞凋亡

大鼠α葡萄糖苷酶（a-Glu）elisa試劑盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究領域  細胞生物 免疫學 染色質和核信號 信號轉導 激酶和磷酸酶

大鼠Ras相關C3肉毒素底物1（RAC1）elisa試劑盒Anti-BAK1 Antibody研究領域  細胞生物 細胞凋亡

3-甲氧基-4-硝基苯酚  二苯基乙氧基膦  (五苯基)二苯基磷

鹽酸莫西沙星  (五苯基)二苯基磷  紅熒烯

N,O-1,3-二乙酰基吲哚  紅熒烯  4,4-雙(5-甲基-2-苯并唑基)二苯

3-溴苯  4,4-雙(5-甲基-2-苯并唑基)二苯  四溴對烯

3-Mercapto-1-hexal  3-巰基-1-己醇  51755-83-0

NICKEL(II) TE BASIC HYDRATE  堿式碳酸鎳  12607-70-4

Nickel(II) nitrate hexahydrate  鎳  13478-00-7

Nickel(II) acetate tetrahydrate  乙酸鎳  6018-89-9

大鼠載脂蛋白C1(APOC1)ELISA試劑盒 ，英文名： APOC1 ELISA Kit

Mouse phosphotylisital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒

MouseLeptin,LEPELISAkit 小鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanfibromodulin,FMODELISAKit人纖調蛋白規格：48T/96T

細胞/組織高質純化高爾基體分離試劑盒10次

ELISAKitMMP-5大鼠基質金屬蛋白酶5規格：48T/96T
犬惡絲蟲PCR檢測試劑盒說明書3-Bromo-4-hydroxybenzaldehyde,97%通用試劑　5G

2-Methoxycinnamaldehyde, predominantly...通用試劑　50G

α-Bromocinnamaldehyde,98%通用試劑　25G

trans-4-Nitrocinnamaldehyde,≥97.0%通用試劑　1G

5-Bromo-2-thiophenecarboxaldehyde,95%通用試劑　5G

2,4-Dimethylbenzaldehyde,≥90%通用試劑　25G

4-(Diethylami)salicylaldehyde,98%通用試劑　5G

4-Formylbenzonitrile,95%通用試劑　5G

3-Formylbenzonitrile,98%通用試劑　1G

Ferrocenecarboxaldehyde,98%通用試劑　1G

Bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxaldeh...通用試劑　5G

Pyridoxal 5′-phosphate hydrate,≥98%通用試劑　1G

3,5-Dibenzyloxybenzaldehyde,98%通用試劑　1G

3-Bromobenzaldehyde,97%通用試劑　25G

4-Benzyloxybenzaldehyde,97%通用試劑　25G
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。