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      藍舌病毒PCR檢測試劑盒說明書

      產品簡介

      藍舌病毒PCR檢測試劑盒說明書
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      更新時間:2021-03-13
      訪問次數:640
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      注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

       產品名稱

       藍舌病毒PCR檢測試劑盒說明書

       規格

       50T

       貨號

       LZP7655

      組成及試劑配制:
      1、酶標板:一塊(96孔)
      2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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      實驗過程:
      一、試劑準備
      1. DNA模板
      2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
      4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
      三、注意事項
      1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
      2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
      3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
      4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
      6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
      高藜蘆酸(標準品)C37H42N2O6(S,S)-(+)-2,二甲氧基-1,雙(二甲氨基)丁烷

      PD0325901C31H46O5碳酸肼

      西他塞坦鈉/司他生坦鈉C9H12O32,2'-雙(2-)-4,4',5,5'-四基-1,2'-聯咪唑[光聚合引發劑]

      西他塞坦鈉/司他生坦鈉C21H20NO6.Cl5'--羥基-2'-甲基-2-萘

      西他塞坦鈉/司他生坦鈉C27H34O12呋喃酮酸酯

      輪環藤寧四酸/1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四酸C8H8O3(+)-二酰基-D-

      拉米夫定C8H8O3磺酸酐

      拉米夫定(標準品)C6H6O3Nα-[(9H-芴-9-氧基)羰基]-L-蘇氨酸叔丁酯

      鹽酸三氟拉C11H10O4α-基肉桂酸酯

      鹽酸三氟拉(標準品)C11H14O41--2,5-二氧基

      皮質甾酮/腎上腺酮C30H30O8甲酰基-β-氨酸

      皮質甾酮(標準品)C42H70O122,6-二并噻唑

      二硫化四基秋蘭姆C10H8O33,5-二氟甲

      雙硫侖(標準品)C7H8O2基化鎂

      楊梅素/楊梅酮C11H10O3(R)-哌-2-羧酸

      楊梅素/楊梅酮(標準品)C8H15NO2氨甲酰基-5-氟基酸

      去氧膽酸C44H58O5酸鎘

      β-環糊精C30H46O3氨基-2,5-二酚

      白介素1受體相關激酶1(IRAK1)ELISA試劑盒phospho-c-Jun/AP-1(Thr91+Thr93)  酸化原癌基因c-Jun500 ul

      白介素1受體拮抗劑(IL1Ra/CD121)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser73)  酸化原癌基因c-Jun1 Pack

      白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser243)  酸化原癌基因c-Jun300 ul

      白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Thr93)  酸化原癌基因c-Jun300 units

      白介素1β前體(pro-IL1B)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser63)  酸化原癌基因c-Jun1 Kit

      白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒Jun B  活化蛋白激酶B100 ul

      白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒Jun D  活化蛋白激酶D100 ul

      白介素18結合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒CK I alpha/STK  屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶100 ul

      白介素18(IL-18)ELISA試劑盒CK II Alpha/STK  屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶100 ul
      藍舌病毒PCR檢測試劑盒說明書補體C4a+C4b蛋白抗體Ginseside F1中文名:人參皂苷F1別名:分子式:C36H62O9

      少突膠質細胞跨膜蛋白抗體Ginseside F2中文名:人參皂苷F2別名:分子式:C42H72O13

      6號染色體開放閱讀框140抗體Ginseside Rb2中文名:人參皂苷Rb2別名:分子式:C53H90O22

      L型鈣通道蛋白抗體Ginseside CK中文名:人參皂苷CK別名:分子式:C36H62O8

      電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體Lucidadiol中文名:別名:分子式:C30H48O3
      檢測步驟:
      一、 試劑的準備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
      試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
      熒光PCR反應液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
      7.2 qPCR反應條件
      將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
      推薦循環條件:
      1循環 50℃ for 2 min
      預變性 1循環 95℃ for 10 min
      PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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