流行性腮腺炎病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
春雷霉素;春日霉素; 克死霉SSTR1 Antibody6-靛紅

土拉霉素A，托拉菌素A,泰拉霉素WBP2 Antibody靛紅

土拉霉素A(標(biāo)準(zhǔn)品)USP8 (D18F6) Rabbit mAb氨基丁縮二

拉氧頭孢鈉FGF Receptor 2 (D4H9) Rabbit mAb2-甲基-6-喹啉羧酸

原花青素Cell Fractionation Antibody Sampler Kit2-溴-5-甲氧基酚

原花青素（標(biāo)準(zhǔn)品）HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjuga)肼鹽酸鹽

胡椒GST (26H1) Mouse mAb (Magnetic Bead Conjuga)鄰酰氨基對酚

胡椒(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjuga)對

紐莫康定B0(肺囊康定) PAX5 (D19F8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)甲基-2-酸酯

福莫特羅 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjuga)甲酸正戊酯

溴甲后馬托品Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjuga)1-CBZ-哌啶酸

酸阿比特龍酯PhosphoPlus® EGFR (Tyr1068) Antibody Duet5-溴-8-硝基異喹啉

溴莫尼定 PSMA2 (D3A4) Rabbit mAb鄰三氟甲氧基

磺草靈Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb (PE Conjuga)羥基哌啶鹽酸鹽

磺草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)NBC1/SLC4A4 AntibodyN-甲基對甲磺酰

磺酸貝托司汀Phospho-GIT2 (Tyr392) (D8N9A) Rabbit mAb2,6-二-

葉綠素銅鈉鹽Upf2 (D3B10) Rabbit mAb2-氟-5-

新綠原酸(標(biāo)準(zhǔn)品)UBE2S (D5H9H) Rabbit mAb鄰溴三氟甲氧基

DNA(胞嘧啶-5)甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNMT3A)ELISA試劑盒CSP   環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)100 ul

DNA(胞嘧啶-5)甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)ELISA試劑盒C-SKI/v-SKI  C-SKI100 ul

DAB2互作蛋白(DAB2IP)ELISA試劑盒Calcitonin  降鈣素100 ul

C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒Calcitonin  降鈣素100 ul

C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒CTBP1  C端結(jié)合蛋白1100 ul

C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒CT DNA (calf thymus DNA)  小牛胸腺DNA 1 Kit

CXC趨化因子受體4(CXCR4)ELISA試劑盒CTGF  結(jié)締組織生長因子100 ul

CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒CD150/SLAM  信號淋巴細胞活化分子CD150100 ul

CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒CD151/MER2/PETA-3  CD151100 ul
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