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中華鱘特定基因序列PCR檢測試劑盒規(guī)格

產(chǎn)品簡介

前列腺特異性抗原(包被)100 ul

巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒PSA 鼠抗前列腺特異性抗原(檢測)20 ul

巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒CPSA(mouse monoclonal) 復(fù)合前列腺特

更新時間:2021-03-13
訪問次數(shù):990
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 中華鱘特定基因序列PCR檢測試劑盒規(guī)格

 規(guī)格

 50T

 貨號

 LZP7892

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
二甲偶氮紫Ic-Kit (Ab81) Mouse mAb-2-羥基甲

二甲基偶氮磺IIIc-Kit (Ab81) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)5-氨基煙酸

H-間二酚(>97.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) Antibody5-氨基-2-吡啶羧酸

偶氮磺III(>90.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) Antibody2-己基-1-癸

2-(磺基偶氮)-1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸三鈉鹽水合物(>95.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb氟-甲氧基

2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二甲氨基酚(>93.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb5-芐氧基吲哚-

(3,5-二溴-2-吡啶偶氮)-1,二(>98.0%(T))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb蒎

5-二基-2-(2-吡啶偶氮)酚(>98.0%(HPLC))JMJD1B (C69G2) Rabbit mAb基甲酸

2,2'-二羥基偶氮(>98.0%(T))Phospho-MAPKAPK-2 (Thr222) (9A7) Rabbit mAbL(-)巖藻糖

芪偶氮Phospho-MAPKAPK-2 (Thr222) (9A7) Rabbit mAb(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜烷-2-基)

熒光鎵試劑(>98.0%(T))ZIP7/SLC39A7 (D1O3A) Rabbit mAb鹽酸強力霉素

浴酮靈二磺酸二鈉鹽Cofilin (D59) Antibody溴甲酸酯

水合紅菲繞啉二磺酸鈉水合物MARK1 Antibody2-甲基-6-基

浴銅靈 (升華提純)(>99.0%(HPLC)(T))Phospho-Ras-GRF1 (Ser916) Antibody富馬酸單酯

紅菲繞啉(升華提純)(>99.0%(HPLC)(T))Ras-GRF1 AntibodyGRUBB‘S第二代催化劑

浴銅靈(>98.0%(T))Axin1 (C7B12) Rabbit mAb甘氨酸芐酯鹽酸鹽

新亞銅試劑半水合物(>98.0%(T))Phospho-Dab1 (Tyr232) Antibody6-硝基-1-茚滿酮

紅菲咯啉(>99.0%(T))Phospho-Dab1 (Tyr220) Antibody甲基-1-茚酮

巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒PHD2  脯氨酸羥化酶2100 ul

巨噬細胞炎癥蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒PS-1 (NT)  早老素蛋白-120 ul

巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒PS-1(CT)  早老素蛋白-1100 ul

巨噬細胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒PS-1  早老素蛋白-1300 ul

巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒PSA  前列腺特異性抗原(包被)100 ul

巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒PSA  鼠抗前列腺特異性抗原(檢測)20 ul

巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒CPSA(mouse monoclonal)  復(fù)合前列腺特異性抗原100µl

巨噬細胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒PMSA/FOLH1  前列腺特異膜抗原100 ul

巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒PSAP/PAP  前列腺酸性酸酶100 ul
中華鱘特定基因序列PCR檢測試劑盒規(guī)格去整合素樣金屬蛋白酶8抗體Haginin A中文名:別名:分子式:C17H16O5

芳香乙酰胺脫乙?;笜拥鞍?/font>3抗體Isoficusin A中文名:別名:分子式:C25H24O5

磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體Narirutin中文名:蕓香柚皮苷別名:柚皮蕓香苷; Isonaringin分子式:C27H32O14

磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體Fura(2",3":7,6)-4'-hydroxyflavane中文名:呋喃(2",3":7,6)-4'-羥基二氫黃酮別名:分子式:C17H12O4

2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體Iridin中文名:野鳶尾苷別名:分子式:C24H26O13
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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