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      超氧陰離子清除能力測試盒(微量法)

      產品簡介

      超氧陰離子清除能力測試盒(微量法)公司正在出售的產品:冰凍切片組織αSMA表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20次內皮生長添加物豬可溶性P選擇(sP-Selectin)ELISA試劑盒,
      石蠟切片組織αSMA表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20次平滑肌生長添加物豬生長激釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒,
      GDF-1 生長、分化因子1抗體化乙輔A(PaCoA)ELISA試劑盒

      更新時間:2022-07-11
      訪問次數:1380
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      公司產品僅供科研使用,下列是產品屬性:

      產品名稱

      英文名稱

      規格

      貨號

      超氧陰離子清除能力測試盒(微量法)


      100管/96樣

      LZ-01X8382

       

      圖片1.png 

      商品介紹:

      測定意義:

      超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質、蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細胞結構和功能的破壞,與機體衰老和病變有很密切的關系,清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關注。

      測定原理:

      AP-TEMED系統產生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應生成NO2-,NO2-與對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負相關。

      自備實驗用品及儀器:

      天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
      注意事項:

      ①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

      ②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

      ③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

      ④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

      ⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

      ⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

      ⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

      ⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

      ⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

      實驗步驟:

      (1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

      (2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

      (3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

      (4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

      (5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

      (6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

      (7)10,000rpm,4℃離心20min

      (8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

      (9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

      (10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

      (11)12,000rpm,4℃離心20 min

      (12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

      (13)加200ul的DEPC處理水溶解

      (14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

      (在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

      操作程序:

      注意:最重要的是及時固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

      1.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

      2.細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養,條件為37℃和5%的CO2,所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。

      3.培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。

      4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。

      5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

      6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

      7.預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體,不洗。

      8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節)。

      9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

      10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗

      11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

      12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

      13.滴加化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

      14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

      15.必要時蘇木素復染,充分水洗。

      16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。

      IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白 (His 標簽)

      ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質激素(18-39)(抗原)

      BID重組小鼠 BID 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

      IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

      CABP5重組人 CABP3 / CABP5 蛋白 (His 標簽) Protein

      FZD4重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

      EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)

      ITGAX & ITGB2重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein

      NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽)

      ACVR2A Protein Mouse 重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標簽)

      EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)

      NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽)

      FZD4重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

      ACVR2A Protein Mouse 重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標簽)

      ITGAX & ITGB2重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein

      FCGR1 Protein Mouse 重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated

      GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1 0.5mgGLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide 胰高血糖素樣肽-1(多肽)

      REG4重組大鼠 REG4 蛋白 (His 標簽) Protein

      FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標簽) Protein

      MSLN Protein Human 重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (Fc 標簽)
      超氧陰離子清除能力測試盒(微量法)Guinea IgG/RBITC 羅丹明標記豚鼠IgG 0.3ml

      Phospho-5-Lipoxygenase(Ser524) 英文名稱: 磷酸化5-脂氧合酶抗體 0.1ml

      Rhesus antibody Rh DNPK1 DNA依賴蛋白激酶催化亞基抗體 規格 0.1ml

      ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗體IgAMulti-class antibodies規格: 48T

      微囊藻毒檢測試劑盒 96孔/盒 適用于水樣、藍藻、魚肉等樣品

      Anti-CK5/FITC 熒光素標記細胞角蛋白5抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml


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