MUC5AC粘蛋白/粘液素5ACELISA試劑盒

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

靶向核糖核(TR)試劑盒連翹酯HDL-苦杏仁 AR,99.0%氫二鈉 AR（劇品）

靶向核糖核(TR)試劑盒連翹酯F氫化 98%三乙酯 99%

蛋白激C(PKC)試劑盒5--苦參C焦亞硫 CP，94.0%氟化，無水 電子級，粉末

蛋白激C(PKC)試劑盒苦參X1,10-菲羅啉(無水) 99%1,1,1,2-四氟乙烷 99.95%

縮(ALD)試劑盒苦參W三聚磷鈉 AR,98%三 AR,99.0%

縮(ALD)試劑盒苦參N錫鈉 AR,55.3% SnO2烯三氟乙酯 包含 100 ppm MEHQ 穩(wěn)定劑,98%

L-乳脫氫(L-LDH)試劑盒苦參S亞硫 AR2,2,2-三氟乙 99.5%

L-乳脫氫(L-LDH)試劑盒苦參L單寧 AR大黃素 ≥90% (HPLC)

性神經(jīng)鞘磷脂(ASM)試劑盒苦參Q3,4,5-三氧苯 99%石杉 分析標(biāo)準(zhǔn)品

性神經(jīng)鞘磷脂(ASM)試劑盒苦參O硫脲 ACS, ≥99.0%石杉 99%

花生四烯5脂加氧(ALOX-5)試劑盒苦參R硝氧鋯 水合物 AR,99.5%和厚樸酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品

花生四烯5脂加氧(ALOX-5)試劑盒苦參K二氧化鋯 AR,99.0%楊梅素 97%

5脂加氧(5-LO/LOX)試劑盒重樓皂V氫氧化鋯 97%楊梅素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

5脂加氧(5-LO/LOX)試劑盒重樓皂H硝氧鋯 99%厚樸酚  ≥98% (HPLC)

腺環(huán)化1(AC-1)試劑盒 重樓皂D化鋯 98%楊梅 98%

腺環(huán)化1(AC-1)試劑盒 伊貝A;辛貝素-3-D-葡萄糖式碳鋯(IV) ≥40% ZrO2 basis 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%
MUC5AC粘蛋白/粘液素5ACELISA試劑盒橙是一種熒光色素，其檢測激發(fā)濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm。它與細(xì)胞中DNA 和RNA 結(jié)合量存在差別，可發(fā)出不同顏色的熒光，與DNA 結(jié)合量少發(fā)綠色熒光，與RNA 結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA 和RNA 染色。

在熒光顯微鏡下觀察，橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。橙AO 常與溴化乙啶EB 合用雙染，因EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的橙工作濃度為0.1%。一般孵育條件是室溫避光15 分鐘。由于不同細(xì)胞對橙的攝取能力不同，該法不一定適用所有細(xì)胞。

儲存：-20℃，避光，有效期12月。