豬痢疾蛇形螺旋體（SH）核酸試劑盒說明書

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
皂黃DAPI1-基-1,2-二酮

橙黃G；酸性橙10DRAQ5®L-天冬酰一水物

喹啉黃DRAQ5®2'-甲氧基酮

橙黃ⅡCD40 (D8W3N) Rabbit mAb氨基喹啉

鹽酸吖啶黃Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution羥基喹啉

柯衣定Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)7-氨基喹啉

日落黃Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)N-氨基-氮雜雙環[3.3.0]辛烷鹽酸鹽

酒石黃；檸檬黃；酸性黃 23Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjuga)特戊

酸性黃17Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb (Biotinylad)2,6-萘二酚

5-TAMRA；5-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞脂Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,7-二羥基萘

吉拉爾特試劑TPhospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb (Biotinylad)睪酮

鉭試劑NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)雙酮葡萄糖

左西孟旦Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Biotinylad)甲酸酯

鋅試劑Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (Biotinylad)鹽酸異

鉛試劑MMP-2 (D4M2N) Rabbit mAb2-巰基并咪唑

鎂試劑ISNARK/NUAK2 Antibody2-甲基環己

鎂試劑IICDK8 (G398) Antibody2-甲基環己酮

高鐵試劑CDK8 (G398) Antibody碳酸

FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒TRP2  酪氨酸酶相關蛋白2100 ul

FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒Thioredoxin  硫氧還蛋白20 ul

FK506結合蛋白12-雷帕霉素相關蛋白1(FRAP1)ELISA試劑盒TRP1/gp75  酪氨酸酶相關蛋白1100 ul

E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒TRPM2  瞬時受體電位離子通道蛋白（M亞家族）100 ul

ERp57 ELISA試劑盒c/Troponin T  心肌特異性肌鈣蛋白T100 ul

E3-RSIκB ELISA試劑盒TSARG3  生精細胞凋亡相關基因3100 ul

D-酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒TSARG4  生精細胞凋亡相關基因420 ul

D-酸ELISA試劑盒TSARG6/DNAJB13  生精細胞凋亡相關基因6100 ul

D-甘油3-酸ELISA試劑盒TSARG7  發生相關的新基因20 ul
豬痢疾蛇形螺旋體(SH)核酸試劑盒說明書巨噬細胞炎性蛋白1α抗體Dihydropisylvin momethyl ether中文名：二氫赤松素單甲醚別名：分子式：C15H16O2

巨噬細胞炎性蛋白19抗體Pisylvin momethyl ether中文名：銀松素單甲醚別名：分子式：C15H14O2

CD244抗體Ethylparaben中文名：別名：Ethyl 4-hydroxybenzoate分子式：C9H10O3

磷酸化細胞角蛋白17抗體m-Methoxyphel中文名：間甲氧基苯酚別名：分子式：C7H8O2

α-s1酪蛋白抗體Caraphel A中文名：別名：分子式：C42H28O9